一、計(jì)數(shù)板選擇與前期準(zhǔn)備：奠定精準(zhǔn)基礎(chǔ)

 

　　選擇適配的計(jì)數(shù)板是首要環(huán)節(jié)。需根據(jù)樣本中霉菌濃度選擇對應(yīng)規(guī)格的計(jì)數(shù)板，常見的1mm×1mm×0.1mm規(guī)格計(jì)數(shù)室（容積0.1μL）適用于中低濃度樣本，高濃度樣本則需搭配稀釋型計(jì)數(shù)板或提前進(jìn)行梯度稀釋。同時，要檢查計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室是否完好，避免因劃痕、污漬影響觀察，使用前需用無水乙醇擦拭計(jì)數(shù)板與蓋玻片，隨后置于酒精燈外焰上方輕微烘烤滅菌，冷卻至室溫后備用，防止溫度差異導(dǎo)致樣本液蒸發(fā)或冷凝。

 

　　二、樣本處理：控制誤差的關(guān)鍵步驟

 

　　樣本稀釋的均勻性直接影響計(jì)數(shù)結(jié)果。液體樣本需采用漩渦振蕩器振蕩1-2分鐘，固體樣本則需按標(biāo)準(zhǔn)比例加入無菌生理鹽水，經(jīng)均質(zhì)器處理成均勻懸液。稀釋過程中，需嚴(yán)格遵循無菌操作，避免交叉污染，且稀釋倍數(shù)需合理選擇——通常以每個計(jì)數(shù)室中霉菌孢子或菌絲體數(shù)量在30-300個為宜，若數(shù)量過多易導(dǎo)致重疊計(jì)數(shù)，過少則會增加統(tǒng)計(jì)誤差。此外，對于含菌絲體的樣本，需避免劇烈攪拌破壞菌絲結(jié)構(gòu)，可適當(dāng)加入少量吐溫-80改善分散性。

 

　　三、計(jì)數(shù)操作：規(guī)范流程保障準(zhǔn)確性

 

　　加樣時需用微量移液器吸取10μL稀釋后的樣本液，緩慢滴加在計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)室邊緣，利用毛細(xì)作用使液體自然充滿計(jì)數(shù)室，避免產(chǎn)生氣泡——若出現(xiàn)氣泡，需重新加樣，因氣泡會遮擋視野，導(dǎo)致計(jì)數(shù)遺漏。蓋玻片的放置也需注意，應(yīng)采用“傾斜式”覆蓋，先將蓋玻片一端接觸樣本液，再緩慢放下，防止液體溢出或產(chǎn)生氣泡。

 

　　計(jì)數(shù)過程中，需遵循“計(jì)上不計(jì)下、計(jì)左不計(jì)右”的原則，避免重復(fù)計(jì)數(shù)或遺漏。對于壓線的霉菌孢子或菌絲體，僅計(jì)數(shù)相鄰兩邊及夾角處的個體。同時，要區(qū)分霉菌與其他微生物（如細(xì)菌、酵母菌），可借助霉菌的菌絲結(jié)構(gòu)、孢子形態(tài)等特征進(jìn)行辨別，必要時可通過染色（如乳酸酚棉藍(lán)染色）輔助觀察。建議對同一樣本進(jìn)行3次平行計(jì)數(shù)，取平均值作為最終結(jié)果，若3次計(jì)數(shù)結(jié)果偏差超過10%，需重新檢測。

 

　　四、結(jié)果分析與清潔維護(hù)：延伸操作價值

 

　　計(jì)數(shù)完成后，需根據(jù)稀釋倍數(shù)計(jì)算樣本中霉菌的實(shí)際濃度（公式：霉菌濃度=計(jì)數(shù)室中霉菌數(shù)量×稀釋倍數(shù)÷計(jì)數(shù)室容積），并結(jié)合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)判斷樣本是否合格。此外，計(jì)數(shù)板的清潔維護(hù)至關(guān)重要，使用后需立即用蒸餾水沖洗計(jì)數(shù)室，再用無水乙醇擦拭干凈，置于干燥盒中保存，避免長期暴露在潮濕環(huán)境中導(dǎo)致發(fā)霉或腐蝕，影響后續(xù)使用精度。